产品货号：
GS1588
中文名称：
免疫组化试剂盒(适用于兔/小鼠源一抗)
英文名称：
Immunohistochemistry kit for rabbit or mouse primary antibody
产品规格：
20T|50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本盒适用范围为石蜡包埋组织切片，也可适用于冰冻切片。
保存：4℃
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- 操作简便：无需太多准备，拿到试剂盒既能开展试验。
- 重现性好：实验结果重复性高。
| 组分 | 20T | 50T |
| 复性剂(溶解前请混匀) | 6g | 15g |
| HRP标记的二抗(抗兔/小鼠) | 500μL | 1.25mL |
| DAB缓冲液(20X) | 50μL | 125μL |
| DAB底物(20X) | 50μL | 125μL |
| DAB色原(20X) | 50μL | 125μL |
| 苏木素体细胞快速染色液 | 1mL | 2.5mL |
保存：4℃
- 二甲苯(2～3个月更换)
- 100%乙醇，95%乙醇，85%乙醇，75%乙醇
- 灭活酶试剂：3% H2O2-甲醇，1mL 30% H2O2加入到9mL甲醇中
- PBST洗涤液：500mL 10×PBS+4500mL ddH2O+5mL Tween-20，混匀，PH 7.2～7.4
- 一抗：根据所购买一抗说明书稀释
- 一抗稀释液(封闭液)：3% BSA-PBST溶液，0.03g BSA溶于1mL PBST
- 1%盐酸-乙醇：1mL盐酸溶于99mL乙醇中
- 抗原修复后需冷却，避免洗涤时脱片。
- 加抗体时避免交叉污染，导致假阳性。
- 显色时间可根据实际染色效果来确定，不一定遵循规定的时间。
- 封片时不要产生气泡，以免影响观察。
- 显微镜观察时可在低倍镜下先找好视野，再换高倍镜拍照。
- 如应用于冰冻切片，请用4℃丙酮固定10分钟，然后从第6步开始操作。
- 组织固定：在脱蜡之前，将切片60℃恒温箱中烘烤60分钟。
- 脱蜡：将切片用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。
- 水化：分别用无水乙醇浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；75%乙醇中浸泡5分钟。
- 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗3次。
- 抗原修复(煮沸法)：压力锅中加入足以淹没切片的10mM的枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)(配制：将复性剂溶于相应体积ddH2O中，混匀)，加热至沸腾，切片置耐热塑料切片架上，放入锅中，盖好锅盖，扣上压力阀，继续加热，设置保压3分钟，时间到后打开放气阀放气，压力归零后开锅盖将内锅取出放置室温冷却，待溶液冷却至室温后取出切片(约30分钟)。
- 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗2次，PBST浸泡5分钟，清洗2次。
- 灭活酶：每张切片滴加50μL灭活酶试剂，室温避光处理15分钟。
- 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。(第一次迅速倒掉)
- 封闭：每张切片滴加3% BSA-PBST 50μL，湿盒中室温封闭30分钟。
- 加一抗：弃去封闭液，每张切片滴加50μL一抗，4℃湿盒中孵育过夜或37℃ 1小时。
- 复温：次日取出切片，室温复温40分钟。(复温仅针对一抗4℃孵育过夜，37℃孵育直接进行下一步)
- 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。(第一次迅速倒掉)
- 加酶标二抗：每张切片滴加HRP标记的二抗(抗兔/小鼠)25μL，室温或37℃孵育30分钟。
- 洗涤：PBST浸泡5分钟，清洗3次。(第一次迅速倒掉)
- 显色(DAB法)：每张切片滴加50μL显色液(显色液配制：85% ddH2O+ 5% DAB缓冲液+5% DAB底物+5% DAB色原，避光现配现用，按需要量配制)，湿盒中显色5分钟。
- 终止显色：用蒸馏水终止显色反应。
- 复染：每张切片滴加50μL苏木素体细胞快速染色液，染色5分钟，用蒸馏水冲洗干净。
- 脱色反蓝：将切片放入1%盐酸~乙醇中脱色3～5秒后迅速取出放入蒸馏水中终止，再放入PBST中反蓝5分钟。
- 封片：分别在75%乙醇中浸泡5分钟；85%乙醇中浸泡5分钟；95%乙醇中浸泡5分钟；无水乙醇中浸泡5分钟。用二甲苯浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟。之后在切片上加中性树胶，加盖玻片。
- 观察：显微镜。
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